目录
前言
第一部分 发酵工程实验 1
Ⅰ. 基础实验 1
实验一 产淀粉酶芽孢杆菌的分离 1
实验二 产蛋白酶菌株的分离 1
实验三 乳酸菌素产生菌的筛选 4
实验四 紫外线诱变选育α-淀粉酶高产菌株 11
实验五 酸性异淀粉酶产生菌的复合诱变育种 11
实验六 细菌原生质体融合实验 14
实验七 微生物菌种的保藏 18
实验八 微生物培养基的优化——单因素实验 22
实验九 微生物培养基的优化——正交试验 22
实验十 霉菌孢子数及发芽率的测定 26
实验十一 细菌生长曲线测定 28
实验十二 细菌淀粉酶酶活曲线的测定 30
实验十三 机械通风搅拌发酵罐的结构认识及操作 30
实验十四 酵母细胞中蔗糖酶粗产物的提取 34
实验十五 枯草芽孢杆菌发酵液中α-淀粉酶粗产物的提取 34
实验十六 厌氧菌的分离及培养技术 34
Ⅱ. 综合设计实验 37
实验十七 生物杀虫剂苏云金芽孢杆菌生产实验 37
实验十八 柠檬酸发酵 39
实验十九 固体发酵生产纤维素酶 43
实验二十 酸奶的发酵 47
第二部分 细胞工程实验 50
Ⅰ. 基础实验 50
实验一 MS培养基母液和培养基的配制 50
实验二 植物组织培养技术 53
实验三 植物细胞的悬浮培养技术 58
实验四 植物原生质体分离鉴定和培养 58
实验五 植物细胞融合 62
实验六 动物细胞融合 62
实验七 动物细胞微丝束的光学显微镜观察 62
实验八 线粒体和液泡系的超活染色与观察 65
实验九 叶绿体的分离与荧光观察 67
实验十 细胞凝集反应 69
实验十一 细胞膜的渗透性测定 70
实验十二 细胞活力检测 72
实验十三 细胞的冻存与复苏 72
Ⅱ. 综合设计实验 73
实验十四 细胞周期检测与同步化 73
实验十五 细胞凋亡观察 76
实验十六 显微注射技术 76
实验十七 杂交瘤技术 77
实验十八 植物细胞的有丝分裂观察及染色体标本制备 83
实验十九 扫描电子显微镜的原理及操作使用 85
实验二十 透射电子显微镜的原理和操作使用 85
第三部分 酶工程实验 87
Ⅰ. 基础实验 87
实验一 酵母蔗糖酶的纯化 87
实验二 圆盘电泳法鉴定酵母蔗糖酶的纯度 89
实验三 酵母蔗糖酶的结晶 90
实验四 酵母蔗糖酶的化学修饰 90
实验五 SDS-PAGE检测蔗糖酶分子质量 92
实验六 酵母蔗糖酶的酶促动力学研究 92
实验七 固定化酵母细胞及蔗糖酶的检测 95
实验八 木瓜蛋白酶消除啤酒中蛋白质浑浊 97
实验九 尼龙固定化木瓜蛋白酶 98
实验十 几丁载体上酶的吸附固定 98
实验十一 β-半乳糖苷酶菌体细胞的固定化 99
实验十二 淀粉酶的提取及活力测定 102
实验十三 大豆肽的制备 102
实验十四 苯丙氨酸解氨酶的纯化及活性测定 103
实验十五 结晶乳酸脱氢酶(LDH)的制备 103
实验十六 辣根过氧化物酶的制备及酶比活力的测定 105
实验十七 凝胶层析柱装填及柱效测定 106
实验十八 模拟过氧化物酶的制备、固定化及应用 112
实验十九 植物组织中蔗糖酶活力的测定 112
实验二十 正交法测定几种因素对酶活力的影响 113
Ⅱ. 综合设计实验 117
实验二十一 酸性磷酸酶的分离纯化及活性测定 117
实验二十二 碱性磷酸酶的分离、纯化及活性测定 131
实验二十三 胰蛋白酶的制备、活力测定及动力学研究 131
实验二十四 重组氯霉素酰基转移酶蛋白的表达、分离、纯化和鉴定 139
第四部分 基因工程实验 145
Ⅰ. 基础实验 145
实验一 植物基因组DNA的提取 145
实验二 细菌基因组DNA的制备 145
实验三 质粒DNA的提取及酶切 145
实验四 琼脂糖凝胶电泳检测DNA 149
实验五 从低熔点胶琼脂糖凝胶中分离回收DNA 片段 150
实验六 目的基因的PCR 扩增和克隆 153
实验七 目的基因的酶切和连接 159
实验八 感受态细胞的制备及转化 163
实验九 转化子的筛选和鉴定 168
实验十 目的基因的原核表达 173
实验十一 植物总RNA的提取 179
实验十二 RNA质量检测 179
Ⅱ. 综合设计实验 180
实验十三 目的基因的RT-PCR检测 180
实验十四 目的基因表达的实时荧光定量PCR 检测 187
实验十五 目的基因的Southern印迹杂交检测 190
实验十六 目的基因表达的Northern印迹杂交检测 195
实验十七 目的基因表达的Western印迹杂交检测 197
实验十八 根癌农杆菌介导的植物基因转化技术 200
主要参考文献 203