模块一动物细胞培养的准备 001
【背景描述】 001
【学习目标】 001
【模块任务】 002
任务1-1动物细胞培养器材的准备 002
● 必备知识 002
一、动物细胞培养的基本概念及优缺点 002
二、动物细胞培养的环境条件 005
三、动物细胞培养实验室的设计与布局 006
四、动物细胞培养设备 007
五、动物细胞培养用品 011
● 操作规程 016
一、动物细胞培养常用设备的使用 016
二、动物细胞培养用品的清洗、包装和灭菌 018
任务1-2动物细胞培养用液的准备 020
● 必备知识 020
一、培养细胞的营养需要 020
二、动物细胞培养用液 022
三、动物细胞培养常用的消毒和无菌处理方法 028
四、动物细胞培养工作的基本要求和工作方法 030
● 操作规程 032
一、动物细胞培养用液的配制和无菌处理 032
二、动物细胞培养的无菌操作 034
【拓展知识】 035
一、动物细胞培养发展史 035
二、动物细胞培养的应用 037
三、动物细胞培养的其他常用液 039
【巩固提升】 040
一、巩固练习 040
二、进阶训练 042

模块二动物细胞的原代培养 043
【背景描述】 043
【学习目标】 043
【模块任务】 044
任务2-1组织块法培养鸡胚成纤维细胞 044
● 必备知识 044
一、培养细胞的细胞生物学 044
二、培养细胞的取材 051
三、组织块培养法 052
四、培养细胞的观察和检测技术 054
● 操作规程 059
一、鸡胚成纤维细胞的原代培养（组织块法） 059
二、体外培养细胞的常规观察 061
任务2-2消化法培养鸡胚成纤维细胞 062
● 必备知识 062
一、组织材料的分离 062
二、消化培养法 064
三、细胞计数 065
● 操作规程 066
鸡胚成纤维细胞的原代培养（消化法） 066
【拓展知识】 068
一、动物正常组织细胞的培养 068
二、肿瘤细胞培养 071
【巩固提升】 075
一、巩固练习 075
二、进阶训练 076

模块三动物细胞的传代、冻存和复苏 077
【背景描述】 077
【学习目标】 077
【模块任务】 078
任务3-1鸡胚成纤维细胞的传代培养 078
● 必备知识 078
一、动物细胞传代培养技术 078
二、细胞系的维持 080
● 操作规程 080
鸡胚成纤维细胞的传代 080
任务3-2鸡胚成纤维细胞的冻存和复苏 082
● 必备知识 082
一、细胞冻存技术 082
二、细胞复苏技术 084
三、细胞活性检查方法 084
● 操作规程 086
一、鸡胚成纤维细胞的冻存 086
二、鸡胚成纤维细胞的复苏 087
三、鸡胚成纤维细胞的活性检查 088
【拓展知识】 089
一、培养细胞的运输和短期保存 089
二、干细胞培养 090
三、三维细胞培养 093
【巩固提升】 096
一、巩固练习 096
二、进阶训练 097

模块四动物细胞的大规模培养 098
【背景描述】 098
【学习目标】 098
【模块任务】 099
任务4-1CHO细胞大规模贴壁培养 099
● 必备知识 099
一、动物细胞大规模培养的一般工艺流程 099
二、动物细胞大规模贴壁培养常用的方法 099
● 操作规程 104
发酵罐大规模贴壁培养CHO细胞 104
任务4-2CHO细胞大规模悬浮培养 108
● 必备知识 108
一、动物细胞大规模悬浮培养技术 108
二、动物细胞培养反应器 109
三、动物细胞大规模培养技术的操作方式 116
● 操作规程 118
一次性生物反应器大规模悬浮培养CHO细胞 118
【拓展知识】 121
一、动物细胞大规模培养常用细胞系 121
二、细胞生物反应器放大技术 123
三、动物细胞固定化培养 126
【巩固提升】 127
一、巩固练习 127
二、进阶训练 129

模块五单克隆抗体生产细胞的制备 130
【背景描述】 130
【学习目标】 131
【模块任务】 131
任务5-1人PD-L1免疫动物的准备 131
● 必备知识 131
一、单克隆抗体的概念 131
二、杂交瘤技术制备单克隆抗体的基本原理 132
三、杂交瘤技术制备单克隆抗体的主要过程 132
四、动物免疫 132
● 操作规程 133
人PD-L1免疫小鼠的准备 133
任务5-2骨髓瘤细胞和脾细胞的融合与筛选 135
● 必备知识 135
一、脾细胞、骨髓瘤细胞及饲养细胞的准备 135
二、细胞融合和杂交瘤细胞的筛选 136
● 操作规程 138
骨髓瘤细胞与脾细胞的融合（PEG融合法） 138
任务5-3抗人PD-L1杂交瘤细胞的筛选 140
● 必备知识 140
一、酶联免疫吸附法 140
二、双向扩散法 141
● 操作规程 142
酶联免疫吸附法筛选阳性杂交瘤细胞 142
任务5-4抗人PD-L1杂交瘤细胞的单克隆化 143
● 必备知识 143
一、有限稀释法 144
二、软琼脂平板法 144
三、显微镜操作法 144
四、流式细胞荧光分选技术 144
● 操作规程 145
有限稀释法单克隆化阳性杂交瘤细胞 145
【拓展知识】 146
一、杂交瘤技术的诞生 146
二、杂交瘤细胞株的冻存和复苏 147
三、单克隆抗体的大量制备与纯化 147
四、细胞的基因转染技术 148
【巩固提升】 151
一、巩固练习 151
二、进阶训练 152

模块六植物细胞的悬浮培养 153
【背景描述】 153
【学习目标】 153
【模块任务】 154
任务6-1MS培养基的制备 154
● 必备知识 154
一、植物组织和细胞培养的基本概念 154
二、植物细胞培养的实验室条件 157
三、植物细胞培养的培养基 162
● 操作规程 169
MS培养基的配制和灭菌 169
任务6-2胡萝卜愈伤组织的诱导 172
● 必备知识 172
一、外植体的选择和预处理 172
二、植物愈伤组织的形成过程 174
三、植物愈伤组织培养的一般程序 175
四、植物组织细胞培养的无菌操作 176
● 操作规程 176
胡萝卜愈伤组织的诱导和继代 176
任务6-3胡萝卜细胞的悬浮培养 177
● 必备知识 178
一、单细胞的分离 178
二、悬浮培养细胞的生长和测定 179
三、植物细胞悬浮培养方式 180
四、悬浮培养细胞的同步化 182
五、植物细胞培养的环境条件 183
● 操作规程 185
胡萝卜悬浮细胞系的建立与继代 185
【拓展知识】 186
一、植物组织细胞培养的发展史 186
二、植物组织细胞培养的应用 188
三、植物细胞的固定化培养 190
四、植物单细胞培养 192
【巩固提升】 195
一、巩固练习 195
二、进阶训练 196

附录细胞培养技术常用术语中英文对照 197

参考文献 201