项目一 质粒pMD18-T-EGFP的分离、纯化和鉴定 一、项目介绍 二、学习目标 三、项目实施 任务一 创建和谐包容性的工作环境 任务二 清洗、包扎常用玻璃器皿和耗材 任务三 配制并灭菌各种浓度单位的溶液 任务四 创建遗传信息流示意图 任务五 碱裂解法分离提取质粒pMD18-T-EGFP及浓度测定 任务六 琼脂糖凝胶电泳鉴定质粒pMD18-T-EGFP 任务七 细菌基因组DNA提取及质量检测 四、项目思考 五、必备知识 （一）基因工程的发展简史 （二）基因工程实验规范 （三）溶液浓度的计算与换算 （四）生物学遗传信息流 （五）DNA的结构 （六）核酸的理化性质 （七）乳糖操纵元 （八）载体（一） 六、拓展知识 （一）基因组大小与基因数量 （二）基因操作对人类生存环境的影响 （三）真核生物DNA的提取 （四）真核基因组DNA的制备技术项目二 绿色荧光蛋白基因(egfp)转录产物RNA的提取 一、项目介绍 二、学习目标 三、项目实施 任务一 总RNA的提取及含量测定 任务二 mRNA的提取与纯化 任务三 RNA琼脂糖凝胶电泳 任务四 Northern blot 四、项目思考 五、必备知识 (一)RNA操作注意事项 (二)RNA的空间结构和功能 (三)mRNA的合成与加工 六、拓展知识 (一)植物病毒的RNA提取 (二)动植物组织mRNA提取 (三)兔肝RNA的制备 (四)人体细胞总RNA和mRNA的提取项目三 体外扩增目的基因——绿色荧光蛋白基因（egfp） 一、项目介绍 二、学习目标 三、项目实施 任务一 以DNA为模板扩增绿色荧光蛋白基因（egfp）——PCR 任务二 以mRNA为模板反转录扩增绿色荧光蛋白基因——RT-PCR 任务三 实时荧光系统通过反转录定量（RT-qPCR）对基因表达进行分析 任务四 cDNA文库构建技术（一）——磁珠法提纯mRNA 任务五 cDNA文库构建技术（二）——cDNA链的反转合成 四、项目思考 五、必备知识 （一）DNA的生物合成 （二）RNA的生物合成 （三）DNA聚合酶的类别和性质 （四）其他工具酶 （五）PCR技术及其在基因克隆中的应用 （六）PCR产物的克隆 六、拓展知识 （一）巢式PCR （二）cDNA文库构建技术项目四 将绿色荧光蛋白基因（egfp）克隆到载体上 一、项目介绍 二、学习目标 三、项目实施 任务一 利用内切酶对载体和基因（egfp）进行酶切 任务二 酶切片段的脱磷技术 任务三 DNA片段的回收技术 任务四 基因的重组连接技术 任务五 cDNA文库构建技术（三）——cDNA的连接、包装及转染 任务六 RACE技术扩增构建全长cDNA文库 四、项目思考 五、必备知识 （一）限制性内切酶分类和催化机制 （二）DNA甲基化酶 （三）DNA连接酶 （四）其他工具酶的催化机制 （五）载体（二） 六、拓展知识 （一）分子标记 （二）RFLP技术 （三）RAPD技术 （四）AFLP技术 （五）SSR技术项目五 将含有egfp基因的质粒转化到li中 一、项目介绍 二、学习目标 三、项目实施 任务一 准备溶液及器皿 任务二 感受态细胞的制备及热激法将质粒转化到li中 任务三 感受态细胞的制备及电击法将质粒转化到li中 任务四 农杆菌转化植物细胞 任务五 磷酸钙转染动物细胞 四、项目思考 五、必备知识 （一）感受态细胞 （二）外源基因导入真核细胞的方法 （三）目的基因的筛选策略 六、拓展知识 （一）基因打靶技术 （二）从基因到基因组项目六 基因（egfp）及基因产物(EGFP)检测参考文献