前言
第一章 基因工程制药技术概述
第一节 基因工程制药技术的基本概念
一、基因工程技术的定义
二、基因工程制药的优点
第二节 基因工程制药技术的应用
一、蛋白质工程的研究和开发
二、转基因动植物生产药物
三、医学研究与新型疫苗的研制
第三节 基因工程制药技术发展趋势和主要成就
一、基因工程制药发展现状
二、主要基因工程药物简介
练习题
第二章 基因工程制药技术常用工具酶
第一节 限制性核酸内切酶
一、限制性核酸内切酶的命名原则
二、限制性核酸内切酶的分类
三、Ⅱ型限制酶的识别与切割序列
四、影响Ⅱ型限制酶作用的因素
五、限制性核酸内切酶在基因工程中的应用
第二节 DNA连接酶
一、DNA连接酶的分类及特性
二、DNA连接酶的催化机制
三、影响连接效率的因素
四、DNA连接酶在基因工程中的应用
第三节 DNA聚合酶
一、大肠杆菌DNA聚合酶工
二、大肠杆菌DNA聚合酶T大片段酶(Klenow片段)
三、T4DNA聚合酶
四、T7DNA聚合酶
五、耐热DNA多聚酶
六、反转录酶(依赖于RNA的DNA聚合酶)
第四节 核酸修饰酶
一、碱性磷酸酶
二、末端转移酶(末端脱氧核苷酸转移酶)
三、T4多聚核苷酸激酶(T4一PNK)
第五节 核酸外切酶
一、ExoⅢ
二、ExoⅦ
三、Xexo
四、T7基因6核苷酸外切酶
五、绿豆核酸酶
第六节 单链核酸内切酶
一、S1核酸酶
二、Bal31核酸酶
三、脱氧核糖核酸酶工(DNaseI)
练习题
第三章 基因工程制药技术常用载体
第一节 基因工程制药的常用质粒载体
一、质粒载体的生物学特性
二、质粒DNA的制备
三、构建质粒载体的基本策略
四、常用的质粒载体
第二节 基因工程制药的常用噬菌体和病毒载体
一、噬菌体载体
二、真核生物病毒载体
三、人工染色体克隆载体
练习题
第四章 基因工程药物目的基因的制备
第一节 药物目的基因的直接分离法
一、限制性内切酶法
二、物理化学法
三、双抗体免疫法
四、反转录法
第二节 构建基因文库分离药物目的基因
一、基因组DNA文库
二、cDNA文库
第三节 利用PCR技术扩增药物目的基因
一、PCR的基本原理
二、引物的设计
三、PCR反应体系
四、PCR反应程序
第四节 药物目的基因的化学合成
一、基因化学合成的概述
二、基因化学合成的方法
练习题
第五章 药物目的基因与克隆载体的体外重组
第一节 DNA片段之间的连接
一、黏性末端连接
二、平齐末端连接
三、同聚物加尾法
四、人工接头连接
五、T—A克隆
第二节 DNA重组类型
一、插入重组
二、置换重组
练习题
第六章 药物目的基因重组克隆载体导入受体细胞
第一节 受体细胞概述
一、受体细胞的概念及其选择的原则
二、几类受体细胞概述
第二节 药物基因重组DNA分子导人原核生物细胞
一、重组质粒DNA分子转化大肠杆菌
二、重组入噬菌体DNA分子转导大肠杆菌
三、受体细胞的选择
第三节 药物基因重组DNA分子导人真核生物细胞
一、借助于载体的基因转移
二、不需载体的基因转移
练习题
第七章 药物目的基因重组载体的筛选、鉴定与分析
第一节 含药物目的基因转化子的筛选
一、根据载体选择标记筛选转化子
二、营养缺陷型的互补筛选法
三、噬菌体筛选法
第二节 药物目的基因重组子的鉴定
一、快速裂解茵落鉴定质粒大小
二、限制酶切图谱鉴定
三、PCR法鉴定
四、核酸分子杂交法
五、免疫学检测法
第三节 药物基因重组DNA的序列分析
练习题
第八章 药物目的基因在宿主细胞中的表达与分离纯化
第一节 药物目的基因的表达机制
一、基因与基因组
二、基因表达的调控元件
三、基因表达的机制
第二节 药物目的基因在原核细胞中的表达及调控
一、原核细胞表达系统概述
二、大肠杆菌表达系统
第三节 药物目的基因在真核细胞中的表达及调控
一、真核细胞中外源基因的表达与调控
二、酵母表达系统
三、哺乳动物细胞表达系统
第四节 药用蛋白的检测与分离纯化
一、药物基因表达产物的检测
二、基因表达产物的分离纯化
练习题
第九章 基因工程制药工程菌和工程细胞的培养和发酵
第一节 基因工程细菌的培养和发酵
一、基因工程茵发酵条件的研究
二、重组大肠杆菌的高密度发酵技术
第二节 基因工程酵母的培养和发酵
一、工程酵母表达融合蛋白的发酵工艺优化
二、基因工程酵母茵的高密度发酵
第三节 工程细胞的培养和发酵
练习题
第十章 基因工程制药产品的质量控制与检验
第一节 基因工程制药产品的质量控制
一、基因工程制药产品的特点
二、基因工程制药产品的质量要求
三、基因工程制药产品的质量控制
第二节 基因工程制药产品的检验方法
一、化学检定法
二、肽图谱分析法
三、外源性DNA残留量的测定．
四、宿主细胞蛋白杂质的检测
五、无菌试验
六、内毒素试验
七、异常毒性试验
八、热原质试验
九、生物学活性(效价)检定
练习题
第十一章 基因工程药物的研制与应用实例
第一节 人白细胞介素基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达
一、人白细胞介素一2(II-2)融合蛋白工程菌的组建
二、人白细胞介素一11(IL一11)的克隆及其融合蛋白表达
第二节 纳豆激酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达
第三节 红细胞生成素基因的克隆及在昆虫细胞中的表达
第四节 红细胞生成素基因的克隆及其在动物细胞中的表达
练习题
基因工程制药技术技能训练项目
技能项目一基因工程制药常用质粒的分离、纯化与鉴定
任务一碱裂解法分离提取质粒
任务二质粒的浓度及纯度分析
任务三琼脂糖凝胶电泳鉴定质粒
技能项目二药物基因的制备
任务一药物基因的PCR扩增
任务二琼脂糖凝胶电泳回收药物基因DNA
技能项目三载体、药物基因的酶切和基因的体外重组
任务一载体和药物基因的限制性内切酶酶切反应
任务二载体片段的脱磷反应
任务三基因的重组连接技术
技能项目四药物基因重组质粒转化受体细胞
任务一感受态细胞的制备
任务二药物基因重组质粒的转化
技能项目五含药物基因重组子的筛选与鉴定
任务一药物基因重组克隆的电泳鉴定
任务二药物基因重组克隆的酶切鉴定
技能项目六药物基因的表达与鉴定
任备一GFP在大肠杆菌中的诱导与表达
任务二SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳检测目的蛋白的表达
参考文献