第一章　基因工程概述
  第一节　基因操作与基因工程
   一、基因操作与基因工程的关系
   二、基因工程的诞生与发展
  第二节　基因工程是生物科学发展的必然产物
   一、基因是基因重组的物质基础
   二、DNA的结构和功能
   三、基因操作技术的发展促进基因工程的诞生和发展
   四、基因工程的内容
  第三节　基因的结构——基因操作的理论基础
   一、基因的结构组成对基因操作的影响
   二、基因克隆的通用策略
 第一篇　基因操作原理
  第二章　分子克隆工具酶
   第一节　限制性内切酶
    一、限制与修饰
    二、限制酶识别的序列
    三、限制酶产生的末端
    四、DNA末端长度对限制酶切割的影响
    五、位点偏爱
    六、酶切反应条件
    七、星星活性
    八、单链DNA的切割
    九、酶切位点的引入
    十、影响酶活性的因素
    十一、酶切位点在基因组中分布的不均一性
   第二节　甲基化酶
    一、甲基化酶的种类
    二、依赖于甲基化的限制系统
    三、甲基化对限制酶切的影响
   第三节　DNA聚合酶
    一、大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ
    二、Klenow DNA聚合酶
    三、T4噬菌体DNA聚合酶
    四、T7噬菌体DNA聚合酶
    五、耐热DNA聚合酶
    六、反转录酶
    七、末端转移酶
   第四节　其他分子克隆工具酶
    一、依赖于DNA的RNA聚合酶
    二、连接酶
    三、T4多核苷酸激酶
    四、碱性磷酸酶
    五、核酸酶
    六、核酸酶抑制剂
    七、琼脂糖酶
    八、DNA结合蛋白
    九、其他酶
  第三章　分子克隆载体
   第一节　质粒载体
    一、质粒的基本特性
    二、标记基因
    三、质粒载体的种类
   第二节　λ噬菌体载体
    一、λ噬菌体的分子生物学
    二、λ噬菌体载体的选择标记
    三、代表性λ噬菌体载体
    四、λ噬菌体载体的克隆原理及步骤
   第三节　单链丝状噬菌体载体
    一、M13噬菌体的生物学
    二、M13噬菌体载体
    三、M13噬菌体载体的宿主菌
    四、丝状噬菌体载体克隆中经常遇到的问题
    五、噬菌粒
    六、M13KO7辅助噬菌体
  第四章　人工染色体载体
   第一节　黏粒载体
    一、黏粒的结构特征和用途
    二、黏粒载体的工作原理
    三、黏粒克隆载体
    四、黏粒文库的扩增和贮存
    五、构建黏粒文库应注意的问题
   第二节　酵母人工染色体载体
    一、YAC载体的复制元件和标记基因
    二、YAC载体的工作原理
   第三节　细菌人工染色体载体
    一、BAC载体及其结构组成
    二、BAC载体工作原理
   第四节　P1噬菌体载体和P1人工染色体载体
    一、P1噬菌体的分子遗传特征
    二、P1噬菌体载体
    三、P1人工染色体载体
  第五章　表达载体
   第一节　大肠杆菌表达载体
    一、大肠杆菌表达载体的结构
    二、利用T7噬菌体启动子的表达载体
    三、表达融合蛋白的表达载体
    四、表达产物的纯化
   第二节　穿梭载体
    一、大肠杆菌/革兰氏阳性细菌穿梭载体
    二、大肠杆菌/酵母菌穿梭载体
    三、其他穿梭载体
   第三节　整合载体
    一、基因插入/基因敲除
    二、随机插入突变载体
  第六章　基因操作中大分子的分离和分析
   第一节　DNA的分离、检测和纯化
    一、大肠杆菌质粒DNA的分离和纯化
    二、DNA的琼脂糖凝胶电泳
    三、聚丙烯酰胺凝胶电泳
    四、脉冲场凝胶电泳
    五、DNA片段的纯化
   第二节　RNA的分离、检测和纯化
    一、控制潜在RNA酶的活性
    二、RNA的抽提和纯化
    三、mRNA的纯化
    四、RNA的电泳检测
   第三节　分子杂交
    一、Southern杂交
    二、Northern杂交
    三、Western杂交
    四、其他分子杂交
    五、探针的标记
   第四节　RNA作图和端点分析
    一、RNA的S1核酸酶作图
    二、S1核酸酶作图分析mRNA的端点
    三、引物延伸法分析mRNA的端点
   第五节　重组DNA分子导入大肠杆菌
    一、CaCl2转化法
    二、电转化法
  第七章　基因芯片技术
   第一节　生物芯片简介
    一、生物芯片的定义
    二、基因芯片分析流程
    三、基因芯片技术的发展史
    四、基因芯片技术的特点
   第二节　生物芯片的分类
    一、按载体材料分类
    二、按点样方式分类
    三、按芯片固定的生物分子类型分类
    四、按芯片使用功能分类
   第三节　基因芯片的制作
    一、DNA样品的来源
    二、生物芯片的制作方法
    三、制作生物芯片常用的工具
    四、DNA分子在刚性表面的固定
   第四节　基因芯片的杂交及结果分析
    一、探针的标记
    二、杂交
    三、芯片结果读取与扫描仪
    四、生物芯片的软件系统与数据处理
   第五节　基因芯片的应用
    一、基因表达分析
    二、基因型及多态性分析
    三、杂交测序
    四、核酸和蛋白质相互作用的研究
    五、疾病的诊断与治疗
    六、药物开发
    七、在营养与食品卫生领域的应用
    八、在环境科学领域中的应用
  第八章　PCR技术及其应用
   第一节　PCR技术原理和工作方式
    一、PCR的基本原理
    二、PCR反应体系
    三、PCR反应程序
   第二节　PCR产物的克隆
    一、在PCR产物两端添加限制性酶切位点
    二、A/T克隆法
    三、平末端DNA片段的克隆
    四、长片段DNA的PCR扩增
   第三节　PCR扩增未知DNA片段
    一、反向PCR
    二、利用接头的PCR
    三、热不对称交错PCR
   第四节　与反转录相关的PCR
    一、cDNA末端的快速扩增
    二、差异显示PCR
   第五节　PCR产生DNA指纹
    一、多重PCR
    二、随机扩增多态性DNA
    三、扩增片段长度多态性
   第六节　实时定量PCR
    一、实时荧光定量PCR的定量方式
    二、荧光标记方式
  第九章　DNA序列分析
   第一节　Maxam-Gilbert化学降解法
    一、基本原理
    二、化学降解测序法的基本步骤
    三、化学修饰试剂
    四、化学降解测序法的应用
   第二节　Sanger双脱氧链终止法
    一、基本原理
    二、序列分析的基本步骤
    三、序列分析的工作模式
   第三节　DNA片段序列测定的策略
    一、通用引物指导未知序列的测定
    二、引物步移
    三、随机克隆测序
    四、缺失克隆测序
   第四节　核苷酸序列的生物信息分析
    一、序列分析和生物信息学的应用
    二、基因数据库和分析工具
  第十章　DNA诱变
   第一节　随机诱变
    一、错误掺入诱变
    二、盒式诱变
    三、增变菌株的诱变作用
    四、化学诱变
   第二节　DNA体外重组
    一、DNA洗牌法
    二、交错延伸重组
    三、随机引发重组
   第三节　寡核苷酸介导的定点诱变
    一、寡核苷酸介导定点诱变的基本流程
    二、诱变寡核苷酸的设计
    三、经典DNA定点诱变
    四、PCR介导的定点诱变
    五、野生型DNA的筛选排除
   第四节　嵌套缺失
    一、嵌套缺失的制备
    二、嵌套缺失的应用
  第十一章　DNA文库的构建和目的基因的筛选
   第一节　基因组DNA文库的构建
    一、基因组DNA文库的类型和发展
    二、文库的代表性和随机性
    三、基因组DNA文库的构建流程
   第二节　cDNA文库的构建
    一、cDNA文库的特征和发展
    二、cDNA文库的构建
    三、cDNA文库均一化处理
    四、扣除杂交cDNA文库
    五、全长cDNA文库
    六、其他cDNA文库
   第三节　基因克隆的筛选策略
    一、表型筛选法
    二、杂交筛选和PCR筛选
    三、免疫筛选
    四、酵母双杂交系统
    五、克隆基因的验证和分析
   第四节　DNA文库的保存
  第十二章　基因组研究技术
   第一节　基因组遗传图谱的构建
    一、遗传作图标记
    二、遗传作图的方法
   第二节　基因组物理图谱的构建
    一、限制性作图
    二、DNA大片段重叠克隆的基因组作图
    三、荧光标记原位杂交作图
    四、序列标签位点作图
   第三节　基因组测序
    一、大规模基因组测序方法学改进
    二、基因组DNA序列的确定
    三、人类基因组测序
   第四节　基因组功能分析
    一、鉴定基因组序列中的基因
    二、基因功能的确定
    三、基因组功能体现
   第五节　基因组工程
    一、基于Cre-loxP重组系统的基因组工程
    二、病毒基因组工程
 第二篇　基因工程应用
  第十三章　植物基因工程
   第一节　植物基因工程的发展现状
   第二节　植物基因工程方法
    一、原生质体介导法
    二、基因枪法
    三、根癌农杆菌介导法
    四、基因枪法与根癌农杆菌介导法的比较
   第三节　转化子细胞的筛选
    一、植物基因工程中的选择基因
    二、报告基因
   第四节　转化体的鉴定与证实
    一、PCR检测外源基因的整合
    二、Southern杂交检测外源基因的整合
    三、RT-PCR检测外源基因的表达
    四、Northern杂交检测外源基因的表达
    五、Western杂交检测外源基因表达的产物
   第五节　植物基因工程研究的应用和展望
    一、抗性基因工程
    二、植物品质改良基因工程
    三、植物杂种优势的利用
    四、植物代谢工程
  第十四章　动物基因工程
   第一节　动物基因工程的发展现状与趋势
    一、转基因方法的升级换代
    二、转基因动物打破了传统的农业生产格局
    三、转基因动物及其产品的生物安全性
   第二节　转基因动物技术
    一、动物基因工程载体
    二、基因转移技术
   第三节　转基因动物制备
    一、转基因动物的制备程序
    二、转基因鉴定
    三、表达水平检测
    四、转基因动物传代与检测
   第四节　转基因动物的应用与未来
    一、转基因动物的应用
    二、转基因动物的生物安全性
    三、动物转基因的未来
  第十五章　酵母基因工程
   第一节　酵母基因工程的发展现状和发展趋势
    一、酵母基因工程的优点
    二、酵母基因工程的发展现状
    三、酵母基因工程的发展趋势
   第二节　酵母表达系统
    一、酵母表达系统概述
    二、常用酵母表达系统
   第三节　酵母基因工程的应用
    一、酵母基因工程的应用情况
    二、酵母基因工程的应用举例
  第十六章　细菌基因工程
   第一节　细菌基因工程的发展现状和发展趋势
    一、细菌基因工程的发展简史
    二、细菌基因工程的发展现状
    三、细菌基因工程的发展趋势及前景展望
   第二节　细菌基因工程的表达系统
    一、细菌基因工程的表达系统
    二、表达载体构建原则
    三、外源基因表达的方式
    四、常见细菌表达系统
   第三节　细菌基因工程的应用
    一、农业领域的基因工程细菌
    二、食品和工业基因工程菌
    三、重组DNA技术生产医用抗生素
    四、环境微生物基因工程菌的应用
  第十七章　病毒基因工程
   第一节　病毒载体
    一、动物病毒载体
    二、植物病毒载体
    三、噬菌体载体
   第二节　病毒与基因工程
    一、基因工程病毒疫苗
    二、病毒与基因治疗
    三、病毒与生物防治
  第十八章　医药基因工程
   第一节　基因工程药物的开发状况
    一、基因工程药物的分类
    二、基因工程药物的发展
    三、基因工程药物的产业化状况
   第二节　基因工程蛋白和多肽药物
    一、基因工程胰岛素
    二、基因工程人红细胞生成素
    三、基因工程干扰素
    四、基因工程疫苗
    五、基因工程抗体
   第三节　基因工程抗体
    一、抗体的结构
    二、天然抗体的局限性
    三、基因工程抗体的种类
   第四节　核酸类药物
    一、反义核酸药物
    二、核酸疫苗
    三、RNA干扰
    四、基因治疗
  第十九章　基因工程产品的安全及其管理
   第一节　基因工程产品的安全性争论
    一、DNA重组的安全性争论
    二、基因工程产品的安全性争论
    三、与基因工程产品的安全性有关的重要事件
   第二节　基因工程产品与人类
    一、基因工程产品与人类健康
    二、基因工程产品与农业生产
    三、基因工程产品与生态平衡
   第三节　基因工程产品的安全性管理
    一、基因工程产品的安全性管理类型
    二、中国基因工程产品的安全性管理
   第四节　基因工程技术及其产品的发展前景
 索引